生化分析仪又叫生化仪,是由电脑控制,将生化分析中的取样、加试剂、混匀、保温反应、检测、结果计算、可靠性判断、显示和打印、以及清洗等步骤组合在一起自动进行操作的分析仪器。
一、生化分析仪的工作原理
生化分析仪的原理是:由多束垂直单色光束照射比色杯内的有色液体,通过被测样品对光能量的吸收,由光电转换器(如光电管)将光信号转换成相应的电信号,该信号经放大、整流、并转换成数字信号,送入计算机,同时计算机控制驱动电力驱动滤光片轮和样品盘,计算机再根据用户选择的工作方式对测量数据进行处理、运算、分析、保存,打印机同时打印出相应的结果,Z后,在测完每组样品之后,进行比色杯清洗。
生化分析仪一般应用终点法、速率法、电极法等几种检测方法,并根据不同的检测方法获得不同的检测项目。
1、终点法原理及其检测项目
终点法是实验室Z常用的方法之一,它是反应混合物经一定时间反应后,达到平衡(终点),即在呈色反应处于稳定阶段时,检测其颜色对光子吸收强度,以此计算待测物的浓度。
终点法包括单波长和双波长终点法、比色法和比浊法、一点终点法和二点终点法(即固定时间法)。终点法主要测试项目有总蛋白、清蛋白、葡萄糖氧化酶、肌肝、特种蛋白及某些药物监测等。
2、速率法原理及其检测项目
速率法是在酶反应的Z适条件下用物理、化学或酶促反应的分析方法,在反应速度恒定期(零级反应期)来连续观察和记录一定反应时间内底物或产物的变化,以单位时间酶反应初速度计算出酶活动的大小和代谢物的浓度。
速率法包括两点速率法和多点速率法。速率法主要适用于酶活性和代谢产物的检测等。
3、电极法原理及其检测项目
电极法是依据离子选择性电极与参比电极的电位测量而发展起来的。在一种电解液中,大多数盐将电离分成离子,在此电解液中插入离子选择电极(指示电极)作为电池的正极,参比电极作为电池的负极,组成原电池,便在相关的离子选择性电极和参比电极之间形成一电位差,即电池电动势,通过测量电池电动势即可测出相应的离子浓度。电极法主要测量项目为K+、Na+、Cl-等。
二、生化分析仪基本结构
生化分析仪可以说是在传统的分光光度计的基础上发展来的,是利用物质对光的吸收作用对物质进行定性或定量检测。在结构上,它包含加样系统、反应系统、检测系统、清洗系统、计算机系统等。
1、加样系统
生化分析仪加样系统是把定量的样本(通常是微量)和试剂加入指定的反应杯以进行反应的关键装置,一般包括定量吸量器、加样针等。
保证加样的精确度方法有:①合理的液路设计和连接技术;②液面检测技术;③随量跟踪技术;④堵塞检测
2、反应系统
生化分析仪的反应比色杯多为转盘形式。反应测定过程中按固定程序,在加样臂、加液臂、搅拌棒、光路和清洗装置之间转动。
有的生化分析仪在反应杯中完成反应后再吸入比色杯比色,现在更常见反应和检测同在比色杯中进行,效率更高,尤其适于连续监测法。比色杯多采用硬质石英玻璃、硬质玻璃、无紫外光吸收的丙烯酸塑料等,使用寿命不一。
3、检测系统
①光源:大多数生化分析仪采用卤钨灯作为光源。卤钨灯在部分紫外区和整个可见光范围内可产生较强的连续光谱,噪声低,漂移小。卤素灯,工作波长为325~800nm。卤素灯的使用寿命较短,一般只有1000~5000h。当灯的发光强度不够时,生化分析仪会自动报警,应及时更换。
②比色杯;比色杯的光径0.5~0.7cm不等,通常为石英或优质塑料。
③分光装置(单色器)和检测器:
分光装置有干涉滤光片和光栅分光两类。干涉滤光片便宜,但易受潮霉变。通过科学、合理的设计,采用滤光片分光方式也可以获得与光栅分光同等的效果。光栅分光可分为全息反射式光栅和蚀刻式凹面光栅两种。前者是在玻璃上覆盖一层金属膜后制成,有一定程度的相差易被腐蚀;后者是将所选波长固定地刻制在凹面玻璃上,耐磨损、抗腐蚀、无相差。光栅分光分为前分光和后分光;后分光的优点是不需移动仪器的任何部件,可同时选用双波长或多波长进行测定,降低了噪声,提高了分析的精度和准确度,减少了故障率。所以,现代大多生化分析仪采用后分光测量技术。
检测器:检测器将光信号转换为电信号。理想的检测器应具有线性范围宽、噪声低、灵敏度高等特点。生化分析仪的检测器一般为光电倍增管或光电二极管。
在生化分析仪中,反应杯清洗可通过两种方案实现,即机内清洗反应杯和自动更换反应杯。采用机内清洗反应杯方式,反应杯是反复使用的。探针和搅拌棒采用激流式等方式自动冲洗。清洗装置一般由吸液针、吐液针和擦拭刷组成。
一般说来,在吸出反应液后,生化分析仪先用碱性液冲洗,再用酸性液冲洗,Z后用去离子水冲洗3遍。擦拭刷的功能是吸去杯壁上挂淋的水,刷体内部有负吸装置。使用进程中要注意擦拭刷是否磨损。
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